洁净无菌车间的湿热灭菌

（1）设计灭菌方法 灭菌程序设计方法主要有两种。其中一种是残存概率法。两种方法都可以使被灭菌物品达到相同的无菌保证水平，选择哪种设计方法很大程度上取决于被灭菌物品的热稳定性。但残存概率法 要求的热能较小，有利于被灭菌物品的稳定性。 残存概率法 不耐热产品或物品的灭菌不能使用另一种方法，这就需要所建立的灭菌程序能恰当地去除微生物，但不能导致产品或物品的降解。这样的灭菌周期的建立有赖于研究产品或 物品上的微生物数量和耐热性。一旦确定了微生物的数量和耐热性，就可以设计出一个能达到 SAL小于 10-6的灭菌程序。 残存概率法设计时，N0和 DT的取值要基于产品或物品在灭菌前污染菌含量检测数据，另需加上余地，它取决于以下方面： a. 专业判断； b. 生物负荷数据的范围； c. 对于产品生物负荷常规测试的程序。 按 GMP 规范生产的产品，实际微生物初始数量应该很低。通常每个容器 1～100 个菌。通常说来，只有环境中形成的芽孢或从产品分离的芽孢才需要测试 D 值。将产品在80～100℃下加热 10～15mm，可以筛选掉耐热性差的微生物。DT值的选择应将初始微生物试验中检出的耐热菌的系数考虑在内。所选定的系数反过来又与初始微生物的数量和耐热性测试的频率和程度相 关。 假设产品的生物负荷测试中： N0=102;D121℃=1min；Z-10℃ 利用以上数值，可以计算出经 121℃灭菌，微生物现存概率小于 10-6所需的FPHY和FBIO如下： F0=FPHY=FBIO= D121℃ X（lg N0-lgNF）=8min 残存概率法设计的灭菌工艺，通常要求对每批产品天菌前进行微生物含量及耐热性测试，积累微生物污染的数据。如果长期以来的数据证明在实际的 GMP 控制条件下，污染水平很低，且检 不到耐热菌，污染菌监控的方案可做适当调整。

（2）确定装载类型 灭菌工艺开发的下一个步骤是确定灭菌物品的种类，确定装载类型。灭菌物品通常划分为多孔/坚硬装载和液体装载。不同装载类型应选择合适的灭菌方法。 ①多孔/坚硬装载 多孔/坚硬装载是指直接接触饱和蒸汽来实现灭菌的物品。当蒸汽在被灭菌物品的表面冷凝时，发生热量转移。多孔/固体物品包括但不局限于下述内容： a. 过滤器《薄模式过滤器、简式过滤器、预过滤器等）； 

b. 胶赛和其他聚合物密封件； c. 管道和软管； d. 工作； e. 清洁设备； f. 设备部件。 ②液体装载 液体装载的灭菌通过传导和（或）对流作用，将能量传递给容器中的内容物。液体装载包括但不局限于以下内容： a.容器（如小瓶、袋、瓶子，针筒或安瓿）的液体（溶液、悬浮液和/或乳剂）； b.实验后或生产后需处理的含有潜在致病微生物的废液。 （3）选择灭菌程序 对于湿热灭菌来说，有两种常用的灭种程序：饱和蒸汽灭菌程序和空气加压灭菌程序。饱和蒸汽灭菌程序通常用于多孔/坚硬装载灭菌，空气加压灭菌程序常用于液体装载灭菌。中净环球净化 可提供洁净车间、无菌车间、无菌实验室等净化工程的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。 下面对这两种灭菌程序做简要介绍。 ①饱和蒸汽灭菌程序 按灭菌**除空气的方式不同，饱和蒸汽灭菌程序分为脉动真空灭菌程序和重力置换灭菌程序。 a.脉动真空灭菌程序 脉动真空灭菌程序在灭菌前通过机械真空泵将空气从腔室中抽走，常用于难以去除空气的多孔/坚硬装载的灭菌，比如软管，过滤器和灌装机部件。灭菌程序开始之前， 对装载的处理很重要。如果每次抽真空至 0.1 个大气压，那么每个脉冲（抽真空-充蒸汽）将使灭菌柜内的空气减少 90%或者 1 个对数单位。三次脉冲可使灭菌柜内的空气下降 3 个对数单位，有 效地将空气去除 99.9%。为了使装载处于正常状态，可能另需正压脉冲（充蒸汽**于大气压，避免空气进人腔室)。通过这个方法，提高去除空气的效率，缩短平衡时间。在制定灭菌程序时，要 准确地确脉冲的衣数和类型。 b.重力置换灭菌程序 重力置换灭菌程序的原理在于灭菌柜腔室中的冷空气比进入的蒸汽重，冷空气被从腔室**部输入的蒸汽往下排挤到腔室的底部，并通过腔室底部的排水管排出。蒸汽往 往通过导流挡板或散流器输至灭出柜腔室。蒸汽注入腔室的速度非常关键，如果蒸汽进入过快或分布不合理，装载的**部或周围可能会夹带空气层。如果进汽过于缓慢，空气受热而扩散入蒸汽 中，从而使排除空气加困难。 重力置换灭菌程序排除空气的效率低于脉动真空灭菌程序，对排气比较闲难的装载而言，不建议采用这类天菌程序。 ② 空气加压灭菌程序 对于液体装载灭菌，液体容器**部常留有小部分气体（空气氮气或其他惰性气体)。当液体被加热时，**部气体膨胀，容器中的压力随之增大。冷却阶段，容器内的温 度**容器外，容器内的压力也会比腔室内压力大。为保持容器的形状和密封完好性，需空气加压，增大腔室的压力，降低腔室和容器内的压差。加压灭菌程序通常采用无油压缩空气，通入腔室 的空气须先经过除菌过滤器过滤。为防止加入冷空气会引起腔室内的温度波动，空气在通人腔室前要预热。常见的空气加压程序有蒸汽-空气混合灭菌程序(SAM)和过热水灭菌程序。 a.蒸汽-空气混合灭菌程序 该程序以空气和蒸汽混合物为加热介质。当蒸汽中加入空气，产生**一定温度下饱和蒸汽压的压力，这种灭菌程序即为蒸汽-空气混合况圈程序。与饱和蒸汽灭 菌相比。它的热传递速率低，灭菌结束后，常见的冷却方法是向灭菌柜夹套通入冷却水，保持空气循环冷却，也可通过在装载上方喷淋冷却水使其降温。 b.过热水灭菌程序 过热水灭菌程序是指在空气加压条件下，以过热水为加热介质进行灭菌。这个程序中，加压是为了保持水在高温下的液体状态。

（4）多孔/坚硬装载灭菌程序开发要素 多孔/坚硬装载灭菌重现性和获取无菌保证水平的大风险是单个产品中可能夹带的空气，因此灭菌前，应确保充分地排除灭菌柜腔室和产品中的容气，同时灭菌过程确保向灭菌柜提供干饱和蒸 汽。通常多孔/坚硬装载灭菌程序的开发需要从以下方面进行考虑。 ①装载冷点 在腔室热穿透试验前进行热分布研究，量出装载的分布图，确定灭菌 品中适当的监控点位置，确定装载中很难加热的部位。 装载的温度测试应取难加热的物品(如质量大的、易包藏空气的、长的软管、或这类特性兼备的装载物品)。做温度分布图时，要比较装载类型对加热的影响(如比较排除空气的难易及大装载加 热的难易程度)，并将温度探头放置在很难加热的位置。 ②装载准备 多孔/坚硬装载的准备方式可有多种，包括但不局限于以下示例： a.用可穿透蒸汽和空气的包装材料将装载包扎（如不脱落纤维的纸或其他聚合包装材料）； b.加盖但不封闭的桶/盒; c.无菌生产中所用的物品加以包装或包扎，以便在使用之前保持无菌状态。包装材料需要考虑空气及冷凝水的排除。避免微生物污染。 ③装载方式 在运行确认后及性能确认前，要确认装载的类型和方式，并有相应记录装载方式的确定应考虑以下方面。 a.装载不能接触腔室内壁。 b.尽可能减小金属容器平面间的接触以及与灭菌车之间的接触。 c.为方便去除空气及冷凝水，明确装载物的方位并有相应记录，如将桶倒置。 d.质量大的装载应放在腔室中较低的架子上，尽量减少冷凝水所致的装载潮湿. e.控制灭菌柜中装载物的数量，如果预期装载物的量是变化的，则需确定小和大装载量。 f.如果确认表明物品的摆放位置不影响灭菌效果，那么装载方式是可变的. g.应制定适当的SOP,便于相关操作人员执行操作。 ④运行参数 建立灭菌程序的关键要素是确定运行参数，以满足灭菌工艺设计的目标并确定它们属关键因素或重要因素。 关键参数涉及产品的和有效性。关键参数不合格可能会导致灭菌的失败，参数不合格时被灭菌产品不得放行。重要参数保证日常灭菌运行处于“受控”状态。重要参数不合格时。需进行 调查并有说明合理处理装载的文作和记录。 ⑤平衡时间 平衡时间表示去除空气并使装载达到灭菌条件的能力。即使达到了设定的灭菌温度，平衡时间的延长也表示去除空气或加热能力的不足。在程序开发中，尽可能减小平衡时间， 采用以下方法可缩短平衡时间。